OBJECTIUS

1. Reconèixer la presència de glúcids monosacàrids.
2. Reconèixer la presència de glúcids polisacàrids.
3. Reconèixer la presència de lípids.
4. Reconèixer la presència de proteïnes.

MATERIAL

Substàncies a analitzar

– Farina (midó (glúcid polisacàrid)) en dissolució en aigua
– Glucosa (glúcid monosacàrid) en dissolució al 3% en aigua
– Oli d’oliva o de girasol (lípid)
– Albúmina d’ou o proteïna de peix (proteïna) en dissolució aquosa 1:6

Reactius i substàncies complementàries

– Aigua destil·lada
– Lugol (1g iode + 2g iode potàssic + 100 cm3 H2O)
– Reactius de Fehling A i Fehling B
– Sudan III (solució saturada amb alcohol de 70º del dia abans)
– Hidròxid de sodi (NaOH) en dissolució aquosa al 10%
– Sulfat de coure (CuSO4) en dissolució aquosa a 0,01 M
– Alcohol
– Mescla desconeguda de substàncies (monosacàrids i/o polisacàrids i/o lípids i/o proteïnes, en dissolució aquosa)

Instruments de laboratori i altres materials

– Vas de precipitats de 500 ml per fer un bany Maria
– Placa calefactora per a escalfar al bany Maria
– 8 tubs d’assaig
– Gradeta de suport dels tubs d’assaig
– Pinça de fusta per a tubs d’assaig- Retolador permanent de punta fina
– Llapis de colors (blau cel, blau fosc, vermell, taronja, groc, violeta,…)

PROTOCOL

Els glúcids (monosacàrids i polisacàrids), els lípids i les proteïnes són biomolècules que constitueixen la base estructural i funcional dels éssers vius. La seva presència als aliments o a qualsevol mescla es pot detectar per mitjà de substàncies reactives que interaccionen químicament amb aquestes biomolècules produïnt un canvi de color determinat:

– El Lugol produeix un color blau fosc en presència de glúcids polisacàrids.

– El reactiu de Fehling serveix per a reconèixer glúcids monosacàrids i disacàrids (excepte la sacarosa). El color taronja intens a la prova indica la seva presència.

– El Sudan III serveix per a reconèixer els lípids, que tenyeix d’un color vermell intens.

– El sulfat de coure (CuSO4) amb l’hidròxid de sodi (NaOH) (reacció de Biuret) produeix un color violeta en presència de proteïnes.

La primera part de la pràctica consisteix en aprendre els protocols d’anàlisi de biomolècules utilitzant aquests reactius i reconèixer el resultat positiu en les proves de control.

La segona part de la pràctica consisteix en aplicar els protocols apresos anteriorment a la determinació de la composició d’una mescla desconeguda.

Realització de les proves de control

Utilitzeu els reactius amb precaució. És important evitar qualsevol contaminació! Afegiu les quantitats indicades mitjançant els comptagotes (evita contaminacions). En el tub d’assaig, 1 ml de substància fa pujar la columna aproximadament 1 cm d’alçada.

PER AL RECONEIXEMENT DE GLÚCIDS POLISACÀRIDS (FARINA (MIDÓ))

1) Agiteu el recipient que conté dissolució de farina en aigua.

2) Col·loqueu 1 ml de dissolució de farina en un tub d’assaig i retoleu-lo “Prova Midó”.

3) Afegiu 2-3 gotes de lugol (Alerta, taca!) i agiteu. La presència de polisacàrids ve indicada per un color blau molt fosc.

4) Explica detalladament i mitjançant dibuixos (com si fossin vinyetes) el procediment dut a terme. Pinta les substàncies i les mescles amb colors.

PER AL RECONEIXEMENT DE GLÚCIDS MONOSACÀRIDS (GLUCOSA)

Per a aquesta prova cal tenir preparat un bany Maria. Per a això, es disposarà al laboratori d’una placa calefactora sobre la qual es col·locarà un vas de precipitats de 500 ml amb uns 350 ml d’aigua de l’aixeta. S’escalfarà l’aigua del bany Maria a una temperatura pròxima a la d’ebullició.

5) Agiteu el recipient que conté dissolució de glucosa al 3% en aigua.

6) Col·loqueu 1 ml de dissolució de glucosa en un tub d’assaig i retoleu-lo “Prova Glucosa”.

7) Afegiu primer 0,5 ml del reactiu de Fehling A i després 0,5 ml del reactiu de Fehling B (Alerta, taca!) i agiteu.

8) Deixeu el tub d’assaig al bany Maria amb la pinça de fusta i observeu els canvis de color que es produeixen (apunteu el temps). La presència de monosacàrids ve indicada per un color taronja fort.

9) Explica detalladament i mitjançant dibuixos (com si fossin vinyetes) el procediment dut a terme. Pinta les substàncies i les mescles amb colors.

PER AL RECONEIXEMENT DE LÍPIDS (OLI D’OLIVA O DE GIRASOL)

10) Col·loqueu 1 ml d’aigua destil·lada en un tub d’assaig i afegiu 1 ml d’oli d’oliva o de girasol (observareu que els líquids són immiscibles). Retoleu el tub d’assaig “Prova Lípid”.

11) Afegiu 2-3 gotes de Sudan III (alerta, taca!), agiteu suaument i espereu uns minuts. La presència de lípids ve indicada per un color vermell intens.

12) Per què la fase inferior resta incolora? Raona la resposta.

13) Explica detalladament i mitjançant dibuixos (com si fossin vinyetes) el procediment dut a terme. Pinta les substàncies i les mescles amb colors.

PER AL RECONEIXEMENT DE PROTEÏNES (ALBÚMINA D’OU O PROTEÏNA DE PEIX)

14) Col·loqueu en un tub d’assaig 1 ml de NaOH al 10 % (Alerta, és corrosiu!).

15) Afegiu 2-3 gotes de sulfat de coure (CuSO4) a 0’01 M i agiteu. La solució ha de donar un color blau.

16) Afegiu 1 ml de dissolució fisiològica d’albúmina al 1:6 i retoleu el tub d’assaig “Prova Proteïna”. La presència de proteïnes ve indicada per un color violeta.

17) Explica detalladament i mitjançant dibuixos (com si fossin vinyetes) el procediment dut a terme. Pinta les substàncies i les mescles amb colors.

Determinació de la mescla desconeguda

En un recipient retolat amb una “X” hi ha una mescla desconeguda de substàncies, i es vol saber si conté polisacàrids, monosacàrids, lípids i/o proteïnes.

18) Repetiu cadascuna de les 4 proves, però substituïu en cada protocol la substància de prova (la farina, la glucosa, l’oli o l’albúmina) per la mescla del recipient X amb l’objectiu de determinar-ne la seva composició.

19) Explica detalladament i mitjançant dibuixos (com si fossin vinyetes) el procediment dut a terme, però alerta a l’hora de pintar, ja que potser no s’obtenen els mateixos colors!

20) Compara els resultats de les proves de la substància X amb els resultats de les proves de control (que com són de control, donaven positiu en la presència de la substància problema), i determina per escrit i de forma justificada la composició de la mescla X.

En acabar la pràctica

21) Tanqueu tots els recipients de reactius i substàncies complementàries i netegeu per fora els recipients.

22) Netegeu tots els tubs d’assaig amb aigua i detergent i esborreu els rètols de retolador permanent amb alcohol (recordeu que algunes substàncies taquen o són corrosives!).

23) Sota la gradeta de suport de tubs d’assaig disposeu un plec de paper de cel·lulosa i poseu-hi els tubs d’assaig sense assecar de cap per avall.

AQUESTA PRÀCTICA ES REALITZARÀ EN GRUPS DE 3 – 4 ALUMNES. HEU D’ORGANITZAR AMB ANTELACIÓ LA DISTRIBUCIÓ DE LES TASQUES I DE LA NETEJA. LLEGIU DETINGUDAMENT LA PRÀCTICA AMB ANTELACIÓ (EL TEMPS ÉS ESCÀS I NO PODEU PERDRE EL TEMPS AL LABORATORI): LA PRÀCTICA ÉS MOLT LLARGA I S’HA DE FER EN UNA SOLA SESSIÓ.

Comparteix