OBJECTIUS

1. Elaborar preparacions microscòpiques de mitosi.
2. Observar i dibuixar cèl·lules vegetals en diferents estadis mitòtics.

MATERIAL

– Arrels meristemàtiques (en creixement) de bulb de ceba o de germinats de gramínies o llegums
– Portaobjectes, cobreobjectes i vidre de rellotge
– Bisturí, pinces i agulla emmanegada
– Paper de cel·lulosa
– Microscopi
– Àcid clorhídric a concentració 1 mol/l
– Blau de toluïdina a concentració 1 g/l d’àcid acètic al 45%
– Aigua destil·lada

(La tinció es pot fer també amb orceïna acètica. En aquest cas, calen les solucions A (2 g orceïna + 55 ml àcid acètic + 8,3 ml àcid clorhídric 1 mol/l + 45,8 ml aigua) i B (2 g orceïna + 55 ml àcid acètic + 55 ml aigua).)

FONAMENTS

La divisió cel·lular a les plantes es troba quasi totalment confinada a unes regions especialitzades denominades meristemes. Els meristemes són de dos tipus: 1) els que troben als àpex de les tiges (meristemes caulinars) i de les arrels (meristemes radiculars), responsables del creixement longitudinal de la planta, i 2) els que es troben circularment a l’interior de la planta (meristemes laterals), responsables de l’engruiximent de les tiges.

Els meristemes es caracteritzen per estar formats per cèl·lules embrionàries en constant divisió cel·lular (mitosi) de manera asíncrona, és a dir, que no totes les cèl·lules es divideixen al mateix temps. Això permet l’observació dels diferents estadis de la mitosi en una mateixa preparació microscòpica.

Per a observar les diferents etapes de la mitosi, és necessari tenyir el DNA perquè ressalti de la resta d’estructures de la cèl·lula. Com el seu nom indica, l’àcid desoxiribonucleic és àcid i, per tant, es pot tenyir amb una substància acolorida que tingui especificitat per les substàncies àcides. El blau de toluïdina té especificitat pel DNA, que el tenyeix de color blau.

PROTOCOL

Extracció de la mostra

1) Tallar 0,3 cm de l’extremitat de les arrels més joves de la planta prèviament germinada durant uns quants dies (bulb de ceba o llavors diverses). Si les arrels són molt gruixudes, dividir-les longitudinalment amb l’agulla emmanegada. El meristema es reconeix perquè forma una zona més enfosquida a l’extrem de l’arrel.

Tinció i squash

2) Disposar els fragments en una gota d’àcid clorhídric sobre un portaobjectes sostingut pel vidre de rellotge i esperar 5 minuts. Després, rentar amb aigua destil·lada i retirar l’aigua sobrant amb paper de cel·lulosa. (En cas d’utilitzar orceïna, afegir orceïna A en comptes d’àcid clorhídric, escalfar lleugerament a la flama i deixar assecar una estona. Després, retirar l’excés de solució amb un paper de cel·lulosa.)

3) Cobrir els fragments amb blau de toluïdina i esperar 5 minuts. Després, rentar amb aigua destil·lada. (En cas d’utilitzar orceïna, afegir 2-3 gotes d’orceïna B en comptes de blau de toluïdina.)

4) Dipositar una gota d’aigua destil·lada sobre els fragments i seguidament el cobreobjectes. Pressionar suaument sobre el cobreobjectes per aixafar lleugerament la mostra (tècnica de squash).

Observació i reconeixement de cèl·lules en procés de mitosi

5) Col·locar la preparació al microscopi utilitzant uns augments que siguin còmodes per a l’observació de les cèl·lules meristemàtiques (comunament 400 augments).

6) Realitzar un escombrat mitjançant els cargols de posició de la platina per detectar cèl·lules en repòs i cèl·lules en mitosi.

ACTIVITATS

A) Identifica amb el nom de la fase mitòtica corresponent cadascun dels números del dibuix següent i ordena les fases en ordre seqüencial:

B) Dibuixa una cèl·lula en repòs i identifica amb fletxes les estructures presents (no oblidis d’indicar els augments).

C) Busca una cèl·lula de cadascuna de les etapes de la mitosi i dibuixa-la tot indicant-ne les parts. Identifica cada dibuix amb el nom de la fase mitòtica i descriu el procés que caracteritza cada fase. Presenta-ho a la pràctica en ordre seqüencial.

Comparteix