OBJECTIUS

1. Extensió i fixació de material biològic.
2. Tinció de preparacions microscòpiques.
3. Observació al microscopi òptic amb grans augments.
4. Descripció i dibuix de bacteris.

MATERIAL

– Llapis 2HB i goma
– Safata de dissecció
– 2 portaobjectes
– 1 cobreobjectes
– Placa de Petri
– Agulla emmanegada
– Espelma de parafina i mistos
– Iogurt natural de qualitat
– Aigua destil·lada
– Alcohol etílic
– Solució de blau de metilè
– Microscopi òptic
– Oli d’immersió

PROTOCOL

Extensió del material

1) Netegeu molt bé els portaobjectes i col·loqueu un d’ells horitzontal sobre la placa de Petri.

2) Poseu 1 gota d’aigua destil·lada sobre el portaobjectes.

3) Amb l’agulla emmanegada agafeu una petita quantitat de iogurt i poseu-la sobre la gota d’aigua destil·lada.

4) Amb l’altre portaobjectes realitzeu un frotis estenent la mostra sobre el primer portaobjectes:

Fixació de la mostra

5) Enceneu l’espelma de parafina amb els mistos.

6) Feu passar el portaobjectes amb la mostra cap amunt per sobre de la flama de manera que la mostra es vagi assecant a poc a poc sense que el calor sigui excessiu (no s’ha de deixar quiet el portaobjectes sobre la flama, sinó que cal fer-lo passar per sobre d’una forma oscil·lant). Una vegada seca la preparació, apagueu la flama.

7) Afegiu a la mostra unes gotes d’alcohol per eliminar l’excés de greixos i espereu 2 minuts.

8) Inclineu el portaobjectes sobre la placa de Petri i renteu la mostra amb unes gotes d’aigua destil·lada.

Tinció

9) Situeu el portaobjectes horitzontal sobre la placa de Petri i cobriu la mostra amb unes gotes de blau de metilè. Espereu 5 minuts.

10) Renteu bé la mostra amb aigua destil·lada sostenint el portaobjectes amb els dits sobre la placa de Petri i deixant que l’aigua s’escoli suaument per sobre de la mostra.

11) Situeu el portaobjectes horitzontal sobre la placa de Petri, deixeu caure una gota d’aigua destil·lada sobre la mostra i tapeu-la amb el cobreobjectes (el cobreobjectes s’ha de recolzar verticalment sobre el portaobjectes a un costat de la mostra i deixar-lo caure a poc a poc a sobre ajudant-vos de l’agulla emmanegada).

12) Assequeu el portaobjectes per sota i pels costats i reserveu-lo al costat del microscopi per a la seva observació.

Reprodueix a la teva llibreta mitjançant dibuixos cadascun dels passos seguits fins ara (des del punt 1 fins al punt 11) com si cada pas fos la vinyeta d’un còmic (o com si es tractés de les instruccions de muntatge d’un moble Ikea). Afegeix una última vinyeta (la número 12) dibuixant-te a tu mateix observant la mostra amb el microscopi. (Aquesta activitat la pots realitzar tranquil·lament a casa.)

Neteja

13) Llenceu el líquid amb blau de metilè directament al forat de l’aigüera per tal d’evitar que aquesta s’embruti.

14) Renteu amb aigua tot l’instrumental utilitzat i assequeu-lo. Deixeu-lo a la safata de dissecció tal i com us l’heu trobat al principi de la pràctica. Cal deixar l’aigüera perfectament neta i endreçada.

Observació

15) Situeu el portaobjectes a la platina del microscopi i fixeu-lo amb les pinces.

16) Baixeu la platina al màxim i poseu l’objectiu de 40x. Pugeu lentament la platina fins a dalt de tot però comprovant que la preparació no toqui l’objectiu. Enfoqueu baixant a poc a poc la platina i observeu.

El iogurt és llet fermentada per dues espècies de bacteris, l’Streptococcus termophilus (petit bacteri que produeix l’aroma característic del iogurt) i el Lactobacillus bulgaricus (bacteri de grans dimensions (0,03 mm) que produeix l’acidesa del iogurt).

Els bacteris poden tenir diferents formes: cocs (esfèrica), bacils (allargada), vibrions (en forma de coma) o espirils (en forma d’hèlix). A més, es poden trobar aïllats o agrupats formant diplococs (en parelles), estreptococs i estreptobacils (alineats en cadenes) i estafilococs (formants agrupacions irregulars).

a. Identifica els bacteris que ressalten tenyits de blau fosc d’entre les restes de iogurt. Quina és l’espècie de bacteri més abundant?

b. Realitza un dibuix esquemàtic del que observes a l’interior del camp visual del microscopi. Per fer-ho, dibuixa a la teva llibreta un cercle de mida similar al camp visual i, tot seguit, dibuixa al seu interior només els bacteris que puguis reconèixer, intentant mantenir la seva mida en relació al cercle visualitzat. No t’oblidis d’indicar els augments.

17) Aviseu al professor per que us posi l’objectiu de 100x. Fixeu-vos bé en la manera que el professor manipula el microscopi per tal de no trencar la preparació ni malmetre l’objectiu. Fixeu-vos també que utilitza oli d’immersió per poder observar a x1000 augments. Realitza les activitats següents:

a. Descriu amb detall el protocol a seguir per a observar una preparació amb l’objectiu de x100 augments.

b. Dibuixa diversos bacteris reproduïnt fidelment les seves formes. Indica al costat de cada dibuix el nom de l’espècie bacteriana i els augments utilitzats.

Recollida

19) Separeu el cobreobjectes del portaobjectes amb molta cura per no malmetre el cobreobjectes i renteu amb aigua els dos vidres sense que es trenquin i assequeu-los.

20) Assequeu si cal el microscopi i guardeu-lo convenientment.

DEIXEU SOBRE LA SAFATA DE DISSECCIÓ TOT L’INSTRUMENTAL TAL I COM US L’HEU TROBAT AL PRINCIPI DE LA PRÀCTICA

Comparteix