Observació i tècnica amb lupa binocular i microscopi òptic

OBJECTIUS

1. Conèixer el funcionament i l’ús segur de la lupa binocular i del microscopi òptic.

2. Seleccionar l’instrument d’observació i els augments adequats al tipus de mostra.

3. Aplicar tècniques simples de preparació i d’observació microscòpica.

MATERIAL

– Lupa binocular

– Microscopi òptic

– Portaobjectes

– Cobreobjectes

– Oli d’immersió

– Placa de Petri

– Pipeta Pasteur

– Pinces i tisores

– Infusoris i algues d’un estany o aquari (també és vàlid qualsevol altre tipus de mostra per a l’observació amb lupa binocular i microscopi)

PROTOCOL

A 1r d’ESO heu tingut l’oportunitat d’utilitzar de manera habitual a les pràctiques de laboratori tant la lupa binocular com el microscopi òptic. Accediu als enllaços anteriors si teniu algun dubte de quin nom reben les diferents parts.

Al microscopi òptic es poden observar objectes de mida molt reduïda, microscòpics, o porcions d’objectes molt primes, transparents. Totes les mostres s’han de muntar en un portaobjectes i cobrir amb un cobreobjectes. Els objectes s’observen amb llum transmesa (és a dir, la llum que es transmet a través de l’objecte).

A la lupa binocular es poden observar tant objectes transparents o semitransparents de mida més gran, com també objectes opacs. En el primer cas és habitual utilitzar llum transmesa, mentre que en el segon cas, s’ha d’utilitzar llum reflectida. La lupa binocular té un commutador per seleccionar el tipus de llum més adequat.

Observació a la lupa binocular amb llum reflectida

a) Posa una mostra d’algues pluricel·lulars a la placa de Petri.

b) Observa a la lupa binocular utilitzant la llum reflectida. Utilitza els diferents augments disponibles.

c) Realitza una descripció del procediment d’enfocament i d’ús de la lupa.

Observació a la lupa binocular amb llum transmesa

d) Amb la mateix mostra, fes observacions utilitzant la llum transmesa. Utilitza els diferents augments disponibles.

e) Fes una descripció de les diferències d’observació i avantatges en l’ús d’un tipus de llum o de l’altre en funció de l’objecte a observar.

Preparació d’una mostra al microscopi òptic

La majoria de microscopis tenen muntats al revòlver 3 objectius que proporcionen diferents augments. Els més habituals són:

f) Selecciona una mostra molt petita i prima d’alga filamentosa i situa-la sobre el portaobjectes net.

g) Si cal, afegeix una gota d’aigua perquè en posar el cobreobjectes tot l’espai entre els dos vidres quedi ocupat per una làmina d’aigua.

f) Deixa caure lateralment i a poc a poc el cobreobjectes net i sec sobre la preparació per evitar que quedin bombolles d’aire. La superfície superior del cobreobjectes ha de mantenir-se seca. Si pels laterals hi ha un excés d’aigua, retira-la ajudant-te d’una mica de paper.

g) Gira el revòlver del microscopi per utilitzar l’objectiu de menys augments (10X) i situa la preparació sobre la platina. Puja la platina al màxim controlant que l’objectiu no toca la preparació.

h) Enfoca fent baixar a poc a poc la platina.

i) Realitza les observacions amb aquest objectiu de pocs augments i, posteriorment, amb el següent objectiu (40X). Per canviar d’objectiu és necessari baixar la platina per tal d’evitar danys al microscopi.

j) Reflexiona per escrit sobre les diferències que observes utilitzant els dos objectius (dimensions del camp visual, definició de les estructures de les algues i microorganismes, ús de la llum, dificultats per enfocar correctament…).

Dissecció òptica

k) Enfoca de nou l’objecte de la preparació amb l’objectiu mitjà (40X).

l) Amb el cargol d’enfocament micromètric puja i baixa reiteradament la platina mentre observes la preparació (el que estàs fent és enfocar les estructures de l’alga que es troben més amunt i més abaix del punt d’enfocament inicial. A aquest procés se li diu dissecció òptica).

m) Reflexiona sobre la utilitat de la pràctica de dissecció òptica.

Observació a 1.000X augments amb oli d’immersió

L’ús de l’objectiu de màxim augment (100X) està reservat a casos en els que és realment necessari treballar a tants augments, per les raons següents:

• Requereix ser molt curós perquè l’objectiu pot tocar la preparació i trencar el cobreobjectes i el portaobjectes, o el que és pitjor, la lent de l’objectiu. Cal baixar totalment la platina abans de posar l’objectiu de màxim augment, i després pujar la platina al màxim sense que l’objectiu arribi a tocar el vidre (cal controlar-ho observant pel costat). L’enfocament es realitza amb el cargol micromètric, sempre baixant la platina.
• L’enfocament és molt difícil, perquè la distància focal és molt curta i és fàcil passar-nos i no trobar el focus si no som molt progressius i lents en l’ús del cargol d’enfocament micromètric.
• L’objectiu de màxim augment (100X) té un conjunt elevat de lents o lents molt corbes. Això provoca que la llum que ens arriba als ulls sigui menor i que es produeixin aberracions i altres distorsions òptiques, especialment si l’objectiu no és de qualitat.
• Per tal de reduir les aberracions òptiques i la pèrdua de llum, és necessari utilitzar l’oli d’immersió, que se situa en forma de gota sobre el cobreobjectes i es deixa que entri en contacte amb la lent de l’objectiu, de manera que la llum transmesa passarà de l’objecte als nostres ulls a través d’aquest oli. Després del seu ús, és necessari netejar el cobreobjectes i la lent de l’objectiu amb molta cura amb una mica de paper de cel·lulosa impregnat en xilè. Tant el xilè com l’oli d’immersió són tòxics, i irriten la pell i les mucoses.

n) Amb l’objectiu mitjà (40X) centra alguna estructura de la preparació que vulguis observar a 1.000X augments. Aquesta estructura ha de ser força transparent.

o) Sense moure la preparació, baixa al màxim la platina i disposa una única gota d’oli d’immersió sobre la preparació en el punt on hi ha allò que has decidit observar.

p) Posa l’objectiu de màxim augment (100X) i puja la platina al màxim sense que l’objectiu arribi a tocar el vidre (l’oli formarà un pont entre la lent i el vidre).

q) Enfoca la preparació amb el cargol micromètric fent baixar amb molt de compte la platina.

r) Després de realitzar les observacions, separa amb seguretat la platina de l’objectiu i neteja amb xilè la lent de l’objectiu.

s) Reflexiona sobre els avantatges i inconvenients en l’ús de l’objectiu de màxim augments.

Després de la pràctica, recorda guardar correctament la lupa binocular i el microscopi òptic i netejar l’instrumental utilitzat.